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小鼠白細(xì)胞介素18ELISA檢測試劑盒分析方法

發(fā)布時間:2021-10-09   點擊次數(shù):1351次

小鼠白細(xì)胞介素18ELISA檢測試劑盒分析方法

試劑盒組成及試劑配制 

1. 酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔)。 

2. 標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):6瓶。

3. 生物素標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。

4. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。

5. 生物素標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)

7. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)

6. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。 

7. 濃洗滌液(Wash Buffer):1×30ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 

8. 終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)

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實驗原理

用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗C3抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗C3抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的C3呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。

標(biāo)本的采集及保存

1. 血清:全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

4. 樣本處理:血清或血漿標(biāo)本推薦稀釋10,000倍。

注:以上標(biāo)本置4℃保存應(yīng)小于1周,-20℃或-80℃均應(yīng)密封保存,-20℃不應(yīng)超過1個月,-80℃不應(yīng)超過2個月;標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進行此項檢測。


小鼠白細(xì)胞介素18ELISA檢測試劑盒分析方法

ELISA試劑盒操作注意事項:

1)試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。

2)實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。

3)不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

4)使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。

5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6)洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

7)底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

8)加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

9)按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作







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