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怎么讓自己成為ELISA實驗大神?

發(fā)布時間:2023-09-19   點擊次數(shù):967次

ELISA實驗步驟少,流程短,購買的即用型試劑盒也都有指導性很強的操作說明書,單次實驗 3-6 小時即可得到結(jié)果,實驗小白也可以很快上手。

 試劑盒回溫




按照說明書要求,取出試劑盒內(nèi)組分,搖勻,置于室溫(20-25℃)充分回溫。若回溫不充分,可能會造成檢測結(jié)果存在較大偏差。



2  樣品及試劑準備

1
樣品準備


  • 按照說明書要求選取和處理樣品,如血清樣品應避免使用溶血或凝固不全的樣品。

  • 樣品稀釋時,應首先保證樣品已恢復至室溫,選用一次性樣品稀釋板稀釋樣品,然后用排槍轉(zhuǎn)移至ELISA板,保證樣品孵育時間一致。禁止使用具有吸附性的細胞培養(yǎng)板

  • 合理安排檢測量,避免ELISA板過多,造成洗板等待時間過長。


2
洗滌液配制

配置洗滌液的蒸餾水或去離子水也需提前回溫。若環(huán)境溫度較低,可置于25℃恒溫箱內(nèi)回溫。

3
濃縮酶標抗體配制
按說明書配置方法,現(xiàn)用現(xiàn)配。建議使用一次性離心管配制,渦旋振蕩,充分混勻


No.3  操作注意事項


1
加樣


  • 吸取液體時選用的移液器量程和所需量接近,添加通用試劑時可反向移液,減小誤差。

  • 樣品開蓋時盡量遠離稀釋板,防止液滴迸濺到稀釋板孔中。

  • 轉(zhuǎn)移樣品時稀釋板在上,ELISA板在下,防止交叉污染。

2
溫育


加液結(jié)束后加蓋封板膜,使用恒溫恒濕培養(yǎng)箱(注意要提前打開培養(yǎng)箱,確保孵育時到達所需溫度),若培養(yǎng)箱不能保證恒濕條件,可自制濕盒,避免培養(yǎng)箱內(nèi)過于干燥,致使孔內(nèi)樣品蒸發(fā)。

3
洗板

洗滌時可使用自動洗板機或多通道移液器


  • 手動洗板時,快速翻轉(zhuǎn)ELISA板將孔內(nèi)溶液甩出,避免孔間交叉污染

  • 每次加入洗滌液后,輕輕震蕩ELISA板后甩出洗滌液,確保洗滌充分。

  • 最后一次洗滌去除洗滌液前,確保下一步要添加的試劑可直接使用,勿使ELISA板處于干燥狀態(tài)下的時間超過一定時限。

  • 最后一次洗滌后,將ELISA板置于吸水紙上輕輕拍干


4
底物顯色

底物溶液需避光放置,加樣時動作迅速,板間加樣時間差距不宜過大。室溫下避光孵育



5
終止反應


加終止液時動作迅速,加完后充分混勻再讀取數(shù)值



6
讀取計算
  • 加入終止液后5分鐘內(nèi)完成讀數(shù),避免因反應時間過長,影響實驗結(jié)果的準確性

  • 讀數(shù)前打開酶標儀,確保酶標儀充分預熱通過自檢,使結(jié)果更穩(wěn)定。

  • 酶標儀需定期校準,避免讀數(shù)存在過大偏差。


No.4  其他注意事項




? 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室溫 20-25℃使用后立即冷藏保存試劑。

? 試劑盒嚴格按照說明書規(guī)定溫度(一般2-8℃)保存。

? 使用微量移液器時,吸取不同的液體后要注意更換槍頭,防止污染。

? 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響 OD 值。

? 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。

? 在儲存和溫育時避免強光直接照射和檢測裝置。



ELISA實驗現(xiàn)在已成為實驗室最為常見的實驗,幾乎人人都能做,但真正做好的沒有幾個,究其原因就是步驟比較簡單,一學就會,卻往往抓不往關鍵,一個小環(huán)節(jié)的錯誤,最終會影響整個實驗結(jié)果,注意以上這些可以幫助我們高效高質(zhì)的完成ELISA試驗。












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